In Cooperation Universitas Gadjah Mada – Humboldt University Berlin
Organizers : Dr. Yekti Asih Purwestri (UGM), Prof. Bernhard Grimm (HUB), Dr. Tri Rini Nuringtyas (UGM), Febri Adi Susanto (UGM), Daniel Hey (HUB), Josephine Herbst (HUB)
PAU BIOTEKNOLOGI UGM
AL1 : expressing CHLM sense mRNA & overproducing MgPMT (daun besar-besar)
AL2 : expressing CHLM antisense mRNA, thereby silencing MgPMT (daun kecil)
Dalam course ini, praktikan menginvestigasi efek mutasi yang menyebabkan kerusakan fisiologis dan vitalitas pada tanaman transgenik. Rangkaian eksperimen yang dilakukan merupakan analisis primary dari jalur transgenik dengan deregulasi biosintesis tetrapyrolle pada tanaman. Data informasi genetik tanaman (DNA, RNA dan level ekspresi protein) diperoleh dari ekspresi gen target Magnesium-protoporphyrin IX methyltransferase (MgPMT) saat terjadi perubahan pada jalur metabolisme biosintesis tetrapyrolle.
Eksperimen yang dilakukan meliputi ; DNA genotyping, semi-quantitative PCR, analisis kuantitas pigmen, analisis immunodeteksi akumulasi CHLM_SYNY3, dan analisis tambahan untuk melihat ekspresi translasional pada promoter beta-glucoronidase (GUS) serta pengamatan flouresensi GFP-fused protein yang terbentuk secara in-vivo pada Arabidopsis thaliana trans.
Metode tidak dituliskan secara detail di blog ini. Jika ingin mengikuti pelatihannya secara lengkap bisa menghubungi PAU Bioteknologi UGM.
1. Analysis of genomic DNA by PCR ‘genotyping’
2. RNA extraction and semi-quantitative PCR
3. Pigmen extraction and quantitative analysis
4. Analysis of protein accumulation by Immunodetection
5. Analysis of expression of Promoter-GUS fusions
6. Analysis of subcellular localization of GFP-fused proteins